细胞转染行为留意事项（中科世康）
发布日期：2024-09-13 07:00 点击次数：54
一、践诺前准备细胞景色：使用方法泛泛、活率在90%以上的健康细胞。确保细胞莫得被细菌、真菌或支原体逼迫。若是细胞是近期复苏的，需要在转染前传代3-4次以规复细胞景色
细胞密度：贴壁细胞转染时，细胞密度一般在70%-90%为宜。悬浮细胞转染时，细胞密度应笔据具体细胞类型转移，一般在2×106-4×106细胞/ml
培养基：使用无抗生素的培养基进行转染，因为抗生素可能影响转染服从。在转染进程中，不错添加血清以保管细胞景色，但某些转染行为（如脂质体转染）可能需要在转染赶赴除血清
二、转染试剂与核酸准备转染试剂：笔据践诺需求聘用适应的转染试剂
某些转染试剂（如非脂质体试剂）不错在含有抗生素的培养基中使用，幸免了细胞染菌的风险。核酸准备：确保质粒DNA或RNA的高纯度、无菌、无内毒素
质粒DNA的OD260/280比值应在1.8以上，暗示DNA纯度较高。关于RNA，尤其是siRNA，相同需要保证高纯度，并幸免RNA酶逼迫
稀释液聘用：在稀释转染试剂和核酸时，淡薄使用无血清或减血清的培养基，因为血清会影响转染复合物的变成
三、转染操作加样律例：遵守转染试剂阐明书中的加样律例，一般先将核酸稀释后加入转染试剂中。温雅操作：在稀释和夹杂转染复合物时，作为要温雅，幸免剧烈奏乐和涡旋，以免破碎复合物结构
逐滴加入：将转染复合物逐滴加入细胞培养基中，并实时充分混匀，幸免培养基局部转染试剂浓渡过高
四、转染后贬责不雅察细胞毒性：转染后24小时内不雅察细胞毒脾气况，如细胞方法变化、物化率加多等。若是毒性较高，可能是转染复合物加入量过高或细胞对转染试剂敏锐所致。更换培养基：关于一些敏锐细胞，转染后6-8小时可更换极新培养基，以裁减转染试剂的毒性
检测转染服从：笔据践诺联想聘用适应的检测行为，如荧皎白微镜不雅察、流式细胞仪分析、qPCR检测mRNA或WB检测联想卵白抒发等
不同的检测行为有不同的最好检测本领，需要笔据本体情况转移
五、其他留意事项竖立对照践诺：竖立阳性对照（如已知抒发荧光的质粒）和阴性对照（如空载体质粒或仅加转染试剂），以评估转染服从和扼杀非特异性影响。优化转染要求：笔据不同细胞类型和转染试剂的特性，优化转染要求，如转染试剂与核酸的比例、孵育本领、转染后贬责等以上仅供参考
